La microscopie multiphotonique est un outil essent iel d’investigation en biologie cellulaire et tissulaire. Son extension à l’endosco pie est l’objet d’intenses efforts de recherche pour des applications en neurosciences (imagerie cé rébrale du petit animal) ou en clinique (diagnostic précoce, aide à la biopsie). Ce manuscr it porte sur le développement d’un endomicroscope multiphotonique présentant des perfo rmances inédites. Ce dispositif est alimenté par un oscillateur titane-saphir standard. Vient ensuite un module de pré- compensation des distorsions linéaires et non linéa ires se produisant dans la fibre endoscopique. Ce module permet d’obtenir des impuls ions compressées de 39 fs à la sortie d’une fibre microstructurée air-silice innovante à double gaine de 5 mètres de long qui est optimisée pour l’excitation multiphotonique (cœur c entral de 3,4 ?m à maintien de polarisation) et la collection du signal produit pa r les cibles biologiques. A l’extrémité de la fibre, on trouve une sonde endoscopique, de 2,2 mm de diamètre pour 37 mm de long, composée d’un micro-scanner à fibre optique et d’un micro-objectif achromatique de distance de travail supérieure à 400 ?m. La résolution spati ale de l’appareil vaut 0,83 ?m et l’acquisition se fait en simultané sur deux canaux spectraux à 8 images/s. L’appareil a permis l’enregistrement d’images in vivo sans marquage des tubules et de la capsule rénale, respectivement par fluorescence à deux photons des flavines et par génération de second harmonique du collagène, avec 30 mW sur les tissus et jusqu’à 300 ?m sous la surface de l’organe